Equine Herpesvirus 4 Real Time PCR Detection Kit

REF: GZE005| SKU: 317259|BRAND: GZ MED

Descrizione Scientifica

Il kit Equine Herpesvirus 4 Real Time PCR è un sistema diagnostico molecolare avanzato per l’identificazione qualitativa dell’acido nucleico di Herpesvirus Equino 4 (EHV-4) negli equini. Sfruttando la tecnologia PCR Real Time basata su sonde ad idrolisi ad alta specificità, il kit offre un fondamentale supporto alla rilevazione e alla diagnosi precoce del virus da tamponi nasofaringei, sangue intero in EDTA o campioni tissutali (fegato, tessuto polmonare). Il sistema integra un controllo interno specifico tarato su regioni conservate del genoma suino per monitorare l’intero flusso di lavoro: dalla corretta raccolta del campione, all’efficacia dell’estrazione del DNA fino all’amplificazione enzimatica, riducendo al minimo il rischio di falsi negativi generati da inibitori della PCR. Sviluppato per l’uso professionale esclusivo in combinazione con il sistema PCR VET di Gangzhu Medical, questo test qualitativo rappresenta uno strumento ad alta precisione per lo screening clinico e l’indagine epidemiologica in ambito veterinario.

Protocollo d’Esecuzione

• Preparazione Campione: Per campioni ematici, addizionare 200 µL di sangue intero in EDTA al buffer di preservazione, agitando accuratamente. Per tamponi nasofaringei, disciogliere completamente il materiale biologico raccolto nel buffer di preservazione. Per campioni tissutali, preparare un omogenato al 10% in PBS o buffer di preservazione (50 mg di tessuto), centrifugare a 5000 r/min per 5 minuti e prelevare 200 µL di surnatante.
• Estrazione Nucleica: Estrarre le cartucce monouso pre-riempite necessarie e rimuovere la pellicola protettiva superiore. Trasferire 200 µL del campione così preparato nel pozzetto di caricamento contrassegnato con la sigla “LB”. Aggiungere nel medesimo pozzetto “LB” 20 µL di sospensione di biglie magnetiche e 20 µL di Proteinasi K.
• Automazione del Processo: Posizionare il puntale conduttivo nella prima posizione della cartuccia di estrazione, a sinistra del pozzetto “LB”. Inserire la cartuccia nell’estrattore automatizzato rispettando l’orientamento corretto e avviare il protocollo preimpostato premendo il tasto “Run”. Il ciclo automatizzato a biglie magnetiche si completa in circa 8 minuti. Un segnale acustico avviserà del termine del processo.
• Allestimento della Reazione PCR: Prelevare accuratamente 20 µL di acido nucleico purificato dal pozzetto di eluizione finale “EB” e trasferirli direttamente nella provetta PCR contenente il reagente liofilizzato (Master Mix). Per il controllo di qualità, allestire parallelamente una provetta con 20 µL di Controllo Positivo (previamente ricostituito con 100 µL di controllo negativo/acqua nuclease-free) e una con 20 µL di Controllo Negativo.
• Dissoluzione e Ciclo Termico: Picchiettare delicatamente il fondo della provetta con le dita per sciogliere completamente il pellet liofilizzato. Assicurarsi, tramite una leggera agitazione o breve centrifugazione, che tutto il volume di reazione risieda sul fondo e che non vi siano bolle d’aria visibili, al fine di prevenire forti interferenze del segnale di fondo fluorimetrico. Posizionare le provette nei pozzetti dello strumento Real-Time PCR VET, impostare il programma specifico leggendo il codice a barre e avviare l’amplificazione.
• Interpretazione Risultati: Analisi guidata dallo strumento basata sui canali di fluorescenza dedicati. Un risultato è considerato Positivo alla presenza di una curva di amplificazione tipica nel canale FAM con un valore di Ct < 36. I campioni Negativi non mostrano curve nel canale FAM (Ct = 0) ma presentano una curva valida nel canale HEX (Controllo Interno) con un valore di Ct < 36. Valori di Ct compresi tra 36 e 40 nel canale FAM indicano un risultato dubbio e richiedono una ripetizione del test.

Tabella delle Performance

Il parere tecnico: L’applicazione clinica professionale di questo sistema Point-of-Care consente di ottimizzare in modo significativo i tempi della diagnostica molecolare per l’Herpesvirus Equino 4. L’impiego di una Master Mix liofilizzata pre-dosata protegge i componenti d’amplificazione dal degradamento termico e azzera gli errori di pipettamento manuale. L’integrazione del controllo interno nel canale HEX garantisce riscontri oggettivi e tracciabili, essenziali per supportare le decisioni cliniche in scuderia. I risultati del test vanno sempre valutati e interpretati dal Medico Veterinario in associazione ai sintomi clinici e all’anamnesi epidemiologica riscontrata.

Team Tecnico BIOLAB Diagnostici – divisione Veterinaria

Biolab è distributore esclusivo Italia di GZ MED