Leptospira spp.
Real Time PCR Detection Kit

REF: GZP007| SKU: 317267| BRAND: GZ MED

Descrizione Scientifica

Il kit Leptospira spp. Real Time PCR è un sistema diagnostico molecolare avanzato per uso professionale veterinario, concepito per l’identificazione qualitativa del DNA di Leptospira spp. in matrici ematiche di canidi e felini. Rappresenta un efficiente ausilio diagnostico a supporto della rilevazione clinica, della conferma di sospetto patologico e delle indagini epidemiologiche relative alla leptospirosi.

Sottotipi e specie rilevati dal test:

• Leptospira interrogans
• Leptospira kirschneri
• Leptospira yasudae
• Leptospira weilii
• Leptospira borgpetersenii
• Leptospira noguchii
• Leptospira alexanderi
• Leptospira adleri
• Leptospira mayottensis

Sfruttando la tecnologia PCR Real Time basata su sonde ad idrolisi ad alta specificità, il sistema garantisce la rilevazione diretta del patogeno superando i limiti oggettivi della diagnostica tradizionale o microscopica nelle prime fasi dell’infezione. Il formato monouso pre-dosato riduce al minimo la manipolazione manuale, limitando la variabilità d’analisi e incrementando la sicurezza operativa in ambiente Point-of-Care.

Protocollo d’Esecuzione

• Preparazione e Raccolta Campione: Utilizzare campioni di sangue intero raccolti in provette provviste di anticoagulante (EDTA). Prelevare accuratamente 200 µL di campione liquido e introdurli nel tubo contenente il reagente di preservazione, dopodiché agitare e miscelare in modo omogeneo prima dell’uso.
• Estrazione Nucleica Automatizzata: Estrarre i kit di reagenti per l’estrazione in base al numero di campioni ed eliminare la pellicola protettiva superiore. Trasferire i 200 µL di campione precedentemente preparato nel pozzetto di lisi contrassegnato con la sigla “LB”.
• Automazione del Processo: Posizionare il puntale conduttivo nel pozzetto corrispondente a sinistra del pozzetto “LB”. Inserire la cartuccia d’estrazione nell’alloggiamento del sistema estrattore automatizzato PCR VET e premere il comando di avvio (“Run”). Il ciclo automatizzato a biglie magnetiche si completa in circa 8 minuti ed è seguito da un segnale acustico di fine processo.
• Allestimento della Reazione PCR: Prelevare esattamente 20 µL di acido nucleico purificato dal pozzetto di eluizione finale “EB” mediante pipetta sterile e trasferirli all’interno della provetta eppendorf contenente il master-mix liofilizzato pronto all’uso. Se necessario, ricostituire il Controllo Positivo liofilizzato con 100 µL di acqua purificata o Elution Buffer e trasferirne 20 µL in una provetta eppendorf PCR dedicata.
• Dissoluzione e Ciclo Termico: Picchiettare leggermente il fondo della provetta PCR con le dita per permettere la completa dissoluzione e miscelazione del reagente liofilizzato. Accertarsi, tramite breve centrifugazione (10 secondi) o movimento manuale, che l’intero volume di reazione risieda sul fondo della provetta e sia privo di bolle d’aria visibili, escludendo potenziali interferenze sul segnale fluorimetrico di fondo. Inserire le provette nel termociclatore Real Time PCR VET, selezionare il programma specifico tramite lettura del codice a barre e avviare la sessione.
• Interpretazione Risultati: L’interfaccia software elabora l’analisi guidata in base alle curve di amplificazione:
  
  • Risultato Positivo: Presenza di una tipica curva di amplificazione a “S” nel canale FAM con un valore di Ct < 36.
  
  • Risultato Negativo: Valore di Ct pari a 0 o pari/superiore a 36 nel canale FAM.

Tabella delle Performance

Il parere tecnico: L’introduzione nella routine clinica di questo test molecolare Point-of-Care rappresenta un valido avanzamento per superare i tempi critici della diagnostica colturale o sierologica classica per la leptospirosi. La configurazione con master-mix liofilizzata pre-dosata protegge l’integrità dei componenti biologici dai gradienti termici e standardizza le operazioni manuali dell’operatore. L’integrazione del flusso con il sistema ad estrattore e termociclatore PCR VET assicura una refertazione oggettiva in circa un’ora. I risultati ottenuti costituiscono un supporto analitico che deve essere sempre valutato e interpretato dal Medico Veterinario in associazione al quadro clinico generale.

Team Tecnico BIOLAB Diagnostici – divisione Veterinaria

Biolab è distributore esclusivo Italia di GZ MED