Toxoplasma gondii per Canidi e Felini Real Time PCR Detection Kit

REF: GZP005| SKU: 317294| BRAND: GZ MED

Descrizione Scientifica

Il kit GZ MED Toxoplasma gondii per Canidi e Felini Real Time PCR costituisce un’architettura molecolare avanzata per la determinazione qualitativa e la rilevazione rapida del DNA di Toxoplasma gondii, parassita protozoario intracellulare ad elevato impatto zoonosico. Basato sulla tecnologia della PCR Real Time accoppiata a sonde fluorogeniche a idrolisi, il saggio fornisce un sensibile supporto alla rilevazione degli acidi nucleici parassitari direttamente da matrici biologiche eterogenee, eliminando la necessità di protocolli microscopici o colturali complessi.

Questo test qualitativo per uso professionale si configura come un moderno ausilio diagnostico destinato in via esclusiva a Medici Veterinari, Ambulatori Veterinari e Cliniche Veterinarie. L’impiego della PCR automatizzata Point-of-Care permette di superare i limiti di sensibilità dei test rapidi immunocromatografici tradizionali e le problematiche legate alle finestre sierologiche o alla persistenza anticorpale, garantendo una discriminazione accurata del genoma circolante in corso. La strutturazione del kit in comodi monotest pre-allestiti riduce sensibilmente i passaggi manuali di pipettamento, riducendo al minimo il rischio di contaminazione crociata da aerosol e massimizzando l’efficienza dei flussi Point-of-Care in sinergia esclusiva con il sistema estrattivo e termociclatore PCR VET di Gangzhu Medical.

Protocollo d’Esecuzione

• Preparazione Campione:
  
  • Campioni liquidi (Sangue intero in EDTA, versamento pleurico, ascite o altri liquidi): Inoculare 200 µL di campione direttamente all’interno della provetta contenente il diluente di conservazione, quindi agitare e miscelare con cura per l’omogeneizzazione. Per i campioni di urina, inoculare 200 µL direttamente nel pozzetto di lisi “LB” della cartuccia.
  
  • Campioni su tampone (tamponi fecali, anali, oculari o rinofaringei): Raccogliere il materiale tramite il tampone clinico monouso. Inserire il tampone nel buffer di conservazione, agitare vigorosamente per facilitare la completa sospensione e dissoluzione dei patogeni, quindi spezzare l’asta nell’apposito punto di frattura prima di richiudere.
• Estrazione Nucleica Automatizzata: Prelevare le cartucce monouso di estrazione necessarie per la sessione di lavoro e rimuovere delicatamente la pellicola protettiva superiore in alluminio. Trasferire esattamente 200 µL della sospensione o del campione biologico preparato nel pozzetto di lisi contrassegnato dalla sigla “LB” (Lysis Buffer).
• Automazione del Processo: Alloggiare il puntale conduttivo per estrazione (magnetic rod sleeve) nella posizione dedicata contrassegnata dal simbolo “O”, situata immediatamente a sinistra del pozzetto “LB”. Inserire la cartuccia nell’apposito modulo dell’estrattore automatizzato PCR VET e avviare il protocollo preimpostato premendo “Run”. Il ciclo robotizzato a sfere magnetiche si conclude autonomamente in circa 8 minuti ed è notificato da un segnale acustico.
• Preparazione della Reazione PCR: Prelevare con cura 20 µL di acido nucleico purificato ed eluito dal pozzetto finale “EB” utilizzando una micropipetta e un puntale sterile con filtro. Trasferire il volume direttamente nella provetta eppendorf contenente la master-mix con reagenti liofilizzati. In caso di impiego del Controllo Positivo, ricostituire il liofilizzato bianco in cluster aggiungendo 100 µL di acqua purificata o Elution Buffer sterile e trasferirne 20 µL nella provetta PCR corrispondente.
• Dissoluzione e Avvio Ciclo Termico: Ricostituire completamente la master-mix liofilizzata picchiettando delicatamente il fondo della provetta con le dita. Assicurarsi, mediante una breve centrifugazione di 10 secondi o un deciso movimento discendente, che tutto il liquido risieda stabilmente sul fondo e che non vi siano bolle d’aria residue, potenziali fonti di interferenza fluorimetrica o di artefatti analitici. Inserire le provette nel termociclatore Real Time PCR VET, configurare i canali tramite software e avviare il profilo termico.
• Interpretazione Risultati: Il software analitico discrimina la presenza dei singoli target combinando i canali di emissione e i valori di Cycle Threshold (Ct):
  
  • Risultato Positivo: Comparsa di una cinetica di amplificazione tipica a forma di “S” accoppiata a un valore di Ct < 36 nel canale specifico del patogeno target.
  
  • Risultato Negativo: Assenza di curva di amplificazione o valore Ct uguale a 0 oppure ≥ 36. Un esito negativo riduce la probabilità di un’infezione attiva da Toxoplasma ma deve essere sempre valutato dal clinico nel contesto anamnestico e clinico generale.

Tabella delle Performance

Il parere tecnico: Questo saggio molecolare rappresenta uno standard d’eccellenza per l’identificazione precoce ed estremamente selettiva di Toxoplasma gondii. Data l’importanza clinica ed epidemiologica di questa zoonosi, poter disporre di una risposta in tempo reale esclude i dubbi interpretativi tipici delle finestre sierologiche o delle oscillazioni anticorpali. La master-mix liofilizzata protegge l’integrità del saggio da fluttuazioni termiche accidentali ed evita errori di manipolazione in clinica. L’integrazione con la piattaforma estrattiva PCR VET riduce i tempi operativi totali a circa un’ora. I risultati del test forniscono un supporto alla rilevazione e devono essere sempre valutati dal Medico Veterinario in base al quadro clinico e all’anamnesi.

Team Tecnico BIOLAB Diagnostici – divisione Veterinaria

Biolab è distributore esclusivo Italia di GZ MED